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浅谈荧光定量pcr技术

荧光增白剂是一种荧光染料,也是一种复杂的有机化合物,其特性就是能产生蓝色荧光,可使肉眼看到的物质很白。


含荧光剂的面膜在紫外光照射下,显现出非常大面积的亮蓝色。稍微接触面膜液体,就会粘附上荧光剂成分,拿了面膜的手,也有荧光。用清水冲洗手3遍后, 手上的荧光剂在紫外光照射下依然发出强烈的亮蓝色光,几乎没有洗掉。改用洗手液清洗3遍,照射后手上也发出蓝光,只是比清水的效果略好一些。用洗面奶清洗,与洗手液的效果差不多,都无法彻底清洗掉残留在手上的荧光。


PCR扩增是在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。在扩增的指数期对起始模板进行定量,在扩增过程中,荧光信号随着PCR产物的增加而增强。刚开始时, 探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
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